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單色光輻射穿過被測物質溶液時，被該物質吸收的量與該物質的濃度和液層的厚度(光路長度)成正比，其關系如下式：
A=-lg(I/I。)=-lgT=kLc
式中:A為吸光度;
I.為入射的單色光強度;
I 為透射的單色光強度;
T 為物質的透射率;
k 為摩爾吸收系數;
L 為被分析物質的光程，即比色皿的邊長
c 為物質的濃度
物質對光的選擇性吸收波長，以及相應的吸收系數是該物質的物理常數。當已知某純物質在一定條件下的吸收系數后可用同樣條件將該供試品配成溶液，測定其吸收度,即可由上式計算出供試品中該物質的含量。在可見光區，除某些物質對光有吸收外，很多物質本身并沒有吸收但可在一定條件下加入顯色試劑或經過處理使其顯色后再測定,故又稱比色分析。由于顯色時影響呈色深淺的因素較多，且常使用單色光純度較差的儀器，故測定時應用標準品或對照品同時操作。
應用領域：
超微量分光光度計已成為現代分子生物實驗室常規儀器。常用于核酸，蛋白定量及細菌生長濃度的定量。
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